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CRISPR/Cas9技術(shù)

基因敲除/敲入細(xì)胞系建立

    CRISPR Cas9 是一種由RNA指導(dǎo)Cas核酸酶對(duì)靶向基因進(jìn)行特定基因修飾的技術(shù)，是細(xì)菌和古細(xì)菌在長(zhǎng)期應(yīng)對(duì)病毒和質(zhì)粒不斷攻擊而演化過(guò)程中形成的一種適應(yīng)性免疫防御機(jī)制，其原理是Cas9蛋白通過(guò)導(dǎo)向性RNA（guide RNA，sgRNA）識(shí)別特定基因組位點(diǎn)并進(jìn)行剪切， 它能夠共定位 RNA、DNA 和蛋白，從而擁有巨大的改造潛力。將蛋白與無(wú)核酸酶的 Cas9(Cas9 nuclease-null)融合，并表達(dá)適當(dāng)?shù)?/span> gRNA，即可靶定任何 dsDNA 序列，而 RNA 可連接到gRNA 的末端，不影響 Cas9 的結(jié)合。因此，Cas9 能在任何 dsDNA 序列處帶來(lái)任何融合蛋白及 RNA，這為生物體的研究和改造帶來(lái)巨大潛力。目前已被廣泛應(yīng)用于基因組的精確編輯修飾，爾丙生物可以提供基于CRISPR / Cas9系統(tǒng)的基因敲除穩(wěn)定細(xì)胞系以及基因敲除小鼠服務(wù)。

服務(wù)流程

1，細(xì)胞分型；

2，細(xì)胞預(yù)實(shí)驗(yàn)；

3，針對(duì)敲除/敲入目的基因設(shè)計(jì)合適靶點(diǎn)；

4，構(gòu)建 cas9-gRNA表達(dá)質(zhì)粒并測(cè)序驗(yàn)證；

5，目的細(xì)胞培養(yǎng)，并將構(gòu)建好的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞；

6，抗性篩選獲得單克隆細(xì)胞；

7，基因敲除細(xì)胞系的檢測(cè)。

客戶提供

1. 待敲除目的基因信息，即靶向DNA信息；

2. 需構(gòu)建敲除株的細(xì)胞信息，如客戶提供細(xì)胞，新鮮細(xì)胞，灌滿培養(yǎng)基運(yùn)輸，或細(xì)胞凍存管，干冰運(yùn)輸。

結(jié)果交付

1， 基因敲除穩(wěn)定細(xì)胞株；

2，驗(yàn)證報(bào)告；

3，詳細(xì)實(shí)驗(yàn)報(bào)告（試劑耗材、儀器設(shè)備、操作）及相關(guān)原始數(shù)據(jù)。